High-performance Liquid Chromatography for Analysis of p-Aminobenzoic Ethyl Ester-converted D-Allose and D-Altrose on XBridge Column Containing Polyethoxysilane

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Title
High-performance Liquid Chromatography for Analysis of p-Aminobenzoic Ethyl Ester-converted D-Allose and D-Altrose on XBridge Column Containing Polyethoxysilane
Title Alternative
ポリエトキシシランを含むXBridgeカラムを用いたp-アミノ安息香酸メチルエステル化D-アロースとD-アルトロース分析のための高速液体クロマトグラフィー
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Description

p-Aminobenzoic ethyl ester (ABEE)-converted four D-aldohexoses including rare sugar D-allose (the C-3 epimer of glucose) were analyzed by high-performance liquid chromatography (HPLC) on two reverse-phase silica columns with a 0.2 M potassium borate buffer (pH 8.9) and acetonitrile (93:7) as the eluent using a detector of fluorescence (excitation of 305 nm and emission of 360 nm). On Cosmosil AR column, the four aldohexoses, which have identical molecular weight, were eluted in the order galactose < mannose < allose < glucose, although mannose, allose, and glucose were insufficiently separated. By contrast, on XBridge column containing polyethoxysilane, the four sugars were completely separated with the sharp peak. Each sugar could be sufficiently detected up to 0.5 nmol (90 ng) with a UV (305 nm) detector and 1 pmol (0.18 ng) with a fluorescence detector. Furthermore, HPLC analysis on XBridge column revealed that rare sugar D-altrose (C-2 and C-3 epimer of glucose) labeled with ABEE was eluted in the position between galactose and mannose. The HPLC analysis described here is simple, reliable, and will be applicable to the identification and quantification of traces of D-allose and D-altrose in biomaterials such as animal blood and plant cells.

希少糖であるD-アロース(グルコースのC-3エピマー)を含む4種のアルドヘキソースをp-アミノ安息香酸メチルエステル (ABEE) 化し,2種の逆相シリカカラムを用いて0.2Mホウ酸カリウム緩衝液(pH 8.9)とアセトニトリル(93:7)を溶出液とした高速液体クロマトグラフィー (HPLC) で蛍光検出器(励起波長 305 nm,測定波長 360 nm)を用いて分析した.Cosmosil ARカラムでは,分子量が同一な4種のアルドヘキソースはガラクトース,マンノース,アロース,グルコースの順に溶出したが,マンノース,アロースとグルコースの相互の分離は不完全であった.それに対してポリエトキシシランを含むXBridgeカラムを用いると,4種の糖は相互にシャープなピークとして完全に分離した.各々の糖はUV検出器(305 nm)では 0.5 nmol (90 ng) 以上, 蛍光検出器では1 pmol (0.18 ng) 以上が十分検出できた.さらに,XBridgeカラムを用いたHPLC分析でABEE標識した希少糖であるD-アルトロース(グルコースのC-2とC-3エピマー)はガラクトースとマンノースの間の位置に溶出した.ここで示したHPLC分析は簡単で信頼性があるので,動物血清や植物細胞のような生体試料中での微量なD-アロースやD-アルトロースの同定や定量に応用可能である.

Author
著者 Okazaki Katsuichiro
著者(ヨミ) オカザキ カツイチロウ
著者(別表記) 岡崎 勝一郎
著者 Izumori Ken
著者(ヨミ) イズモリ ケン
著者(別表記) 何森 健
Publication Title
香川大学農学部学術報告
Volume
60
Start Page
47
End Page
52
Publisher
香川大学農学部
Published Date
20080222
ISSN
0368-5128
NCID
AN00038339
Resource Type
Departmental Bulletin Paper
Language
eng
Text Version
publisher
Set
香川大学
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