モノクローナル抗体(AF.2)結合イムノアフィニティーカラム-HPLC法によるトウモロコシおよびピーナッツ中のアフラトキシン類の測定

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URI http://shark.lib.kagawa-u.ac.jp/kuir/metadata/1305
Title
モノクローナル抗体(AF.2)結合イムノアフィニティーカラム-HPLC法によるトウモロコシおよびピーナッツ中のアフラトキシン類の測定
Title Alternative
DETERMINATION OF AFLATOZINS IN CORN AND PEANUT BY AN IMMUNOAFFINITY COLUMN BOUND AF.2 MONOCLONAL ANTIBODY-HPLC METHOD
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Description

抗アフラトキシンB1(AFB1)モノクローナル抗体(AF.2)を結合したイムノアフィニティーカラム(IAC)を作製し,トウモロコシおよびピーナッツ中のAF類の測定法を検討した.諸条件を検討した結果,トウモロコシでは,試料10gに2 gのNaClと50 mlのメタノール:水(70+30 v/v)を加え,抽出し,ろ液を蒸留水で3倍希釈しゲル1 mlに4 mgの抗体を結合させたIACでクリーンナップを行い,蛍光HPLCで定量した.添加回収実験の結果,1,3と10 ng/gのAF類添加での回収率は,72~88%で,RSDは4%以下でほぼ満足のいくものであった.また,このIACでは,トウモロコシ抽出ろ液希釈液を連続7回までのクリーンナップが可能であった.ピーナッツでは,試料10gに30 mlのアセトニトリル:水(60+40 v/v)を加え抽出し,ろ液をPBSで10倍希釈しゲル1 mlに16 mgの抗体を結合させたIACでクリーンナップを行い,蛍光HPLCで定量した.添加回収実験の結果,1,3と10 ng/gのAF類添加での回収率は,87~104%で,RSDは8%以下でほぼ良好であった.また,このIACでは,ピーナッツ抽出ろ液希釈液を連続5回までのクリーンナップが可能であった.本IAC-HPLC法と多機能カラム法で自然汚染検体を分析した結果,両者の測定値に高い相関性が認められた.

In order to establish an immunoaffinity column-HPLC method for aflatoxins (AFs) in corn and peanut, anti-AFB1 monoclonal antibody (AF.2) was bound to Affi-Gel 10 gel (4 and 16 mg/ml), and the antibody-binding gel was packed into a mini column. Corn spiked AFs (10 g) were added 2 g NaCl and extracted with methanol : water (70+30) The extact were 3-fold diluted with water and cleaned-up by the IAC (4 mg antibody / ml gel). These recoveries of AFs were 72~88% and RSD were 0.5~3.5%. The IAC could be re-used 8 times for clean-up. Peanut spiked AFs (10 g) and extracted with acetonitrile : water (60+40) The extact were 10-fold diluted with PBS and cleaned-up by the IAC (16 mg antibody / ml gel). These recoveries of AFs were 87~104% and RSD were 2.7~7.4%. The IAC could be re-used 5 times. Naturally contaminated samples were analyzed our IAC-HPLC method and multi-functional column method. The both data were highly correlated.

Author
著者 宮本 邦裕
著者(ヨミ) ミヤモト クニヒロ
著者(別表記) Miyamoto Kunihiro
著者 濱田 あゆみ
著者(ヨミ) ハマダ アユミ
著者(別表記) Hamada Ayumi
著者 川村 理
著者(ヨミ) カワムラ オサム
著者(別表記) Kawamura Osamu
Publication Title
香川大学農学部学術報告
Volume
60
Start Page
75
End Page
81
Publisher
香川大学農学部
Published Date
20080222
ISSN
0368-5128
NCID
AN00038339
Resource Type
Departmental Bulletin Paper
Language
jpn
Text Version
publisher
Set
香川大学
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