二次元電気泳動法によるエンバク葉の可溶性蛋白質の分離

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Title
二次元電気泳動法によるエンバク葉の可溶性蛋白質の分離
Title Alternative
Separation of soluble proteins of oat leaves by two-dimensional gel electrophoresis
File
Description

Separation of soluble proteins of oat leaves was examined by two-dimensional acrylamide gel electrophoresis of O'Farrell with a slight modification. The supernatant of oat leaf homogenate obtained by the centrifugation at 10,000 × g for 15 min was used as a soluble protein fraction. The first dimensional electrophoresis was conducted by isoelectric focusing method by adding 9.2M urea and 2% Nonidet P-40 to protein samples and gels. The best separation of proteins for the two-dimensional electrophoresis was achieved by the electrophoresis of 500μg proteins with a pH 4.2-8.8 gradient at 25V/gel for 18 hours. The gel was then extruded into 50ml of 62.5mM Tris-HCl buffer (pH 6.8) containing 2.3% sodium dodecylsulphate (SDS), 10% glycerine and 5% β-mercaptoethanol and shaken at 25℃ for 6 hours. The second dimensional electrophoresis was carried out on discontinuous SDS-acrylamide gel plates, giving current of 20mA for 6.5 hours. This procedure provided the resolution of 143 spots of proteins on the gel plate with high reliability.

O'FARRELLの二次元電気泳動法により, エンバク (Avena sativa L.) 子苗葉の可溶性蛋白質の分離を試みた. (1) 可溶性蛋白質には磨砕液を10,000 × g, 15分遠心分画した上澄液を用いた. 等電点分画法による一次元電気泳動は試料およびゲルに9.2M尿素および2%ノニデットP-40を加え, 蛋白質量を500μg添加して, 25V, 18時間通電すると, 明瞭なバンドが検出された. 泳動後のゲル中のpH勾配は4.2-8.8であった. (2) 上記のゲルを2.3%SDS, 10%グリセリン, 5%β-メルカプトエタノール含有の62.5mMトリス-塩酸緩衝液(pH6.8)50mlに25℃, 6時間浸漬した後, 不連続SDS-アクリルアミドゲル法により二次元電気泳動を20mA, 6時間30分行うと, 高い再現性で143コのスポットが検出された.

Author
著者 山本 弘幸
著者(ヨミ) ヤマモト ヒロユキ
著者(別表記) Yamamoto Hiroyuki
著者 広部 健一
著者(ヨミ) ヒロベ ケンイチ
著者(別表記) Hirobe Ken-ichi
Publication Title
香川大学農学部学術報告
Volume
29
Issue
1
Start Page
77
End Page
82
Publisher
香川大学農学部
Published Date
197709
ISSN
0368-5128
NCID
AN00038339
Resource Type
Departmental Bulletin Paper
Language
jpn
Text Version
publisher
Set
香川大学
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